心肌细胞缺氧缺血清及再灌流模式试验方法!

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心肌细胞缺氧缺血清及再灌流模式试验方法!
 
(1)实验目的:
利用H9C2心肌细胞缺血缺氧的情况,以模拟心肌梗塞情况。
 
 
(2)实验材料:
H9C2细胞,H9C2 medium,细胞培养箱,No Glucose DMEM,Biospherix Model Proox,Calibration Chamber,Calibration Chamber with tubing,N2。
 
 
(3)实验方法:
1.从冰箱中取出要用到的材料,并利用37℃水浴槽回温。
2.进行Biospherix Model Proox主机校正。
3.拔下Calibration Chamber后方的O2 sensor,接上Calibration Chamber with tubing,另一端接上主机前方的Bleed gas outlet小孔。
4.将GAS钮搬动在OFF位置。
5.开N2气,慢慢鬆开Bleed Valve,观察O2读值,应为0,若不为0,则需进行ZERO校正。
6.ZERO功能校正:通是按↑↓键3秒,会进入Program mode,再按↓键会看到LEVEL目录,按住*键以↑键选择目录3,放开*键后按↑键至ZERO功能,按住*键再以↑↓键调整数值(↑键为增加,↓键为减少),调整完毕,同时按↑↓键3秒会到Work mode,观察O2读值约5分钟,反覆调整直到读值为0%。
7.关紧Bleed Valve,拔开Sensor,让Sensor在室温下测大气O2浓度约5分钟,若不为21%,则需校正。
8. SPAN功能校正:通是按↑↓键3秒,会进入Program mode,再按↓键会看到LEVEL目录,按住*键以↑键选择目录3,放开*键后按↑键至ZERO功能,按住*键再以↑↓键调整数值(↑键为增加,↓键为减少),调整完毕,同时按↑↓键3秒会到Work mode,观察O2读值约5分钟,反覆调整直到读值为21%。
9.关闭无菌操作台UV灯,并开启无菌操作台风扇及日光灯。喷酒精于无菌操作台平面,并擦拭乾淨,以达到消毒效果。
10.将要使用到的物品,喷酒精消毒,并擦拭乾淨,再带入无菌操作台内。
11.将细胞,喷酒精消毒,并擦拭乾淨,再带入无菌操作台内。
12.将玻璃吸管接再pump的塑胶吸管上。
13.去除细胞培养液,再加入PBS清洗细胞,并来回轻轻摇摆几次。
14.控制组加入5ml H9C2 medium,实验组则加入5ml No Glucose DMEM。
15.控制组放入培养箱培养。
16.实验组则放入0%氧气的Calibration Chamber培养24小时。
17.取实验组移置到培养箱培养1,3,6小时。
18.于时间点收集细胞。

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