标题:详细解说针对未经纯化材料的血清反应侦测方法!金相思思热99re热在线视频实体店!

信息分类:站内新闻   作者:yiyi发布   时间:2012-2-7 18:05:53 将本页加入收藏

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正文:

植物作物病毒病害血清学诊断:
    若能制备或购买到各种作物病害的抗血清,则能利用抗血清中的抗体IgG能和原来产生抗体的抗原(病原)发生专一性反应的原理,即能快速简便侦测到有否病原之存在。
    血清诊断的应用,依检查目的的不同有多元抗体(polyclonal antibody)与单元抗体(monoclonal antibody)之分,多元抗体对侦测有否病原的存在较有利,有如散弹枪,而一般针对未经纯化材料的血清反应侦测方法甚多,较常用的简述如下:

1.双向琼脂扩散试验(Double diffusion agar assay):
首先在思思热99re热在线视频玻片或培养皿上制备琼脂凝胶板,凝固后依实际需要,在琼脂上挖几个小孔,孔间保持一定距离,然后将抗原与抗体分别注入小孔中,使它们互相扩散,经过一段时间后,于抗原与其相应抗体接触处,形成清晰之白色沈淀弧。每一相应的抗原抗体仅能形成一条沈淀弧,因此依据其沈淀弧之数目,即可推测抗原液中,有多少种抗原,也可依据沈淀弧融合或交叉关系,鉴定两种抗原是否完全相同,部分相同或完全不同

2.酶连结抗体法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA):
酶连结抗体法又称酶免疫久久热免费视频法(enzyme immunoassay, EIA),主要用于免疫诊断病毒感染和其他微生物抗原,敏感度高。其所测定之原理依据有二点:(1)抗体与部分抗原能吸附于聚乙烯苯(polysytrene)平板小孔内,而仍可保持其完整之免疫力;(2)抗原和抗体能与酶结合形成复合物,此复合物也仍保持完整的免疫和酶功能。一般较常应用的方法有双重抗体三明治法(double antibody sandwich assay)和间接免疫吸附法(indirect immunosorbent assay)。以前者为例说明:
      双重抗体三明法(图5.4),本法用于检测和定量抗原。使用本法时,首先把抗血清加入聚乙烯苯平板之小孔内,抗血清中之抗体即附着于小孔之内层表面,然后加入抗原,若抗原与小孔内层之抗体产生专一性反应,用清水洗涤以去除游离或未结合之抗原,抗原仍保留在该处。然后加入酶标记之酶─抗体结合物,此结合物会结合于第一次抗体所固定之抗原上,而形成抗体(含酶)─抗原─抗体之三明治,最后加入能与酶反应的受质。酶反应速率与小孔中酶标记抗体之含量成正比,受质经酶而水解,使溶液之颜色起变化,可藉肉眼观察或分光亮度计测定。若抗原与第一次吸附性抗体发生反应,则呈阳性反应,若抗原与吸附的抗体无反应,则因未结合抗原已被清洗掉,而呈阴性反应。

3.单元抗体(Monoclonal antibody):
所谓单元抗体简言之是由一个抗原决定基(epitope = antigen determine side )所产生出来的抗体称为单元抗体,单元抗体用于微量抗原的检测,从而促进了诊断技术和病毒株鉴定技术的发展和准确性。
通常一个病毒表面就有许多抗原决定基存在,因此想要得到单元抗体,首先要以病毒为抗原免疫注射至白鼠,然后取出脾脏并分离出脾脏细胞(splen cell)与事先培养准备好的骨髓肿瘤细胞(myeloma cell)培养融合,在选择性培养基培养下,筛选出脾脏细胞和骨髓肿瘤细胞相互融合的细胞,此种细胞称为融合瘤(hybridoma)。所得的融合瘤经过单一融合瘤细胞筛选培养,如此所产生出来的抗体就叫单元抗体,又经过反应鉴定该单元抗体的性质后,便可靠继代培养大规模地生产高效价、高度专一化的抗体,用以诊检植物病毒、细菌和真菌等。具快速和准确的特点。
上述之骨髓肿瘤细胞能在体外传代繁殖,而免疫动物的脾脏细胞则能产生抗免疫抗原的抗体,两者融合后的融合瘤细胞则兼有能产生抗体和体外大量繁殖的特点。











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